细胞培养的实验步骤 细胞培养实验步骤图

简要说明培养细胞的过程

1.提前30min打开超净台的紫外，把细胞瓶，吸管也放超净台里；

细胞培养的实验步骤 细胞培养实验步骤图

2.提前10min打开37度水浴锅，把培养基，PBS热一热；

3 .把紫外关掉，培养基，胰酶都拿进超净，先拧松个个瓶盖，把细胞瓶里培养基扔掉，用PBS洗3次；

4.滴入胰酶，在37度培养箱片刻，细胞能掉下来即可；

5.加入培养基，吹开细胞。一瓶传代两瓶里，也可1：4.

6.放入培养箱培养，每天观察一次。如细胞长满了就要传代。

广东医？

细胞生物学：小鼠胚胎干细胞培养实验步骤

以下是根据NIH老年病研究所提供的英文的R1胚胎干细胞培养protocol整理而成。根据经验作部分修改。

1、一般培养-保持胚胎干细胞处于未分化状态

培养基

细胞复苏

冻存细胞

明胶包被

细胞传代

2 、体外分化

培养基

包被有多聚鸟氨酸/纤维结合蛋白的培养板（使用或不使用盖玻片）

体外分化方法

注：以下培养针对于小鼠的R1胚胎干细胞系，其它胚胎干细胞的培养可以参考。不过人的胚胎干细胞培养不可以采用下面的protocol，需要用专用的protocol和培养基。

一般培养——维持ES细胞处于未分化状态

ES细胞培养用含有LIF（白血病抑制因子）和Feed细胞的培养基（高糖）来阻止细胞的分化。为细胞提供包被有0.1％明胶的平板作为粘附细胞的基质。建议每2－3天从达到80％－90％融合的平板按1：8的比率传代细胞一次，细胞传代以后，在将细胞接种在0.1％明胶包被的培养皿之前，通过预先将细胞接种在没有经过包被的组织培养板2个小时，使分化细胞粘附，从而将分化和未分化细胞分开。将细胞全程置于37℃，5％CO2，100％湿度条件下培养。如果在Feed细胞，那么就需要采用MMC进行处理，抑制Feed细胞增殖，但仍然能保持其分泌LIF因子的活性。下文中暂不提及Feed细胞。Feed细胞可以来源于STO细胞或原代胚胎成纤维细胞。

培养基

ES：

配制一20×不含DMEM，HS，LIF的溶液（该溶液也能用于EB培养基——见下文）。分装在50ml 离心管中，（稀释为2×，每管42ml），贮存在-20℃。通过将21ml该溶液，HS和LIF加入450ml DMEM中制备培养基，0.22 μm滤膜过滤。贮存于4℃，时间不要超过2周。

贮存液

DMEM（高糖）

马血清（HS）

L-谷氨酰胺（200mM）

MEM NEAA（10mM）

HEPES（1M）

β-（55Mm）

PEST

LIF

复苏细胞

细胞被冻存在10％亚砜（DMSO）中防止结晶的形成，结晶的形成会损害细胞。然而，亚砜对细胞有毒性，快速的进行细胞复苏是很重要的。

步骤：

1.从液氮中取出一管细胞；

2.将冻存管置于37℃水浴中2分钟（或放到管内溶液恰好完全溶解）；

3.将细胞转移到一15ml Falcon管中；

4.加入5ml ES培养基（用培养基冲洗冻存管）；

5.离心3分钟；

6.弃上清，用2ml ES培养基重悬细胞，至少吹打10次；

7.接种在明胶包被（见下文）的6孔或6cm组织培养皿；

8.孵育。

动物细胞的培养实验过程？

取动物组织块——剪碎组织——用胰蛋白酶处理分散成单个细胞——制成细胞悬液——转入培养液中（原代培养）——放入二氧化碳培养箱培养——贴满瓶壁的细胞用酶分散为单个细胞制成细胞悬液——转入培养液（传代培养）——二氧化碳培养箱

,2,1从动物的组织切片中取下小片样品。2胰蛋白酶酶解，消化组织中的胶原纤维和细胞外的其他成分，获得单个的成纤维细胞悬浮液。3转入特殊培养液中进行原代培养（培养液一般是血浆和一些必要的激素以及营养物。该过程在二氧化碳培养箱中保温进行。。。...,0,你的问题有点不清楚, 是动物细胞的传代培养还是原代培养??

原代培养:

取动物相关组织块=====剪碎组织=====胰蛋白酶处理,同时过筛子100目或者其他=====制成细胞悬液====培养箱中培养=====如果是贴壁细胞, 待细胞完全贴壁, 弃上清并用PBS洗几遍==进入传代培养

传代培养:

1. 贴壁细胞:

弃培养液===PB...,0,